Page 66 - Perdih, Andrej, Katja Lakota, Alja Prah. 2020. Strukture bioloških molekul. Univerzitetni učbenik z recenzijo in navodila za vaje. Koper: Založba Univerze na Primorskem.
P. 66
andrej perdih, katja lakota, alja prah
poleg 2D COSY korelacijskih vrhov opazimo za protone še dodatne vrhove, npr. tudi med
protonom NH in med protonoma Hb in Hg.
Slika 7. (Zgoraj) Sklopitve, ki jih zaznamo z 2D COSY in TOSCY NMR, ter pripadajoča spektra
valina posneta z obema tehnikama. (Spodaj) Prikaz dveh neskopljenih protonov, ki sta v
prostoru blizu skupaj. Njuno interakcijo lahko zaznamo z izvedbo 2D NOESY NMR
eksperimenta.
Za določitev 3D strukture proteina je posebej pomemben pojav, ki ga imenujemo jedrni
Overhauserjev efekt (ang. nuclear Overhauser effect - NOE). NOE je po definiciji prenos
polarizacije jedrnega spina iz ene spinske populacije jeder na drugo v procesu „navzkrižne
relaksacije“. Poenostavljeno je NOE interakcija magnetno aktivnih jeder oz. sklapljanje dipolov,
ki poteka preko prostora in ne preko kemijskih vezi, kot to velja za 2D COSY in TOCSY poskuse.
NOE dosežemo z aplikacijo specifične pulzne sekvence in tako detektiramo jedra, ki so
prostorsko blizu skupaj, vendar niso povezana preko kovalentnih vezi. 2D NOESY (Nuclear
Overhauser Effect SpectroscopY) NMR spektroskopija omogoča detekcijo interakcije med
atomi, ki so oddaljeni do približno 5-6 Å. Dobljeni 2D NOESY spekter je na prvi pogled podoben
2D COSY spektru, s signali resonanc istih jeder na diagonali. Signali, ki ne ležijo na diagonali, pa
nastanejo zaradi NOE in povezujejo resonanco tistih jeder, ki so prostorsko blizu. Med 2D NMR
poskusi, kjer opazujemo interakcijo preko prostora, omenimo še različico 2D NOESY
eksperimenta 2D ROESY (Rotating frame nuclear Overhauser Effect SpectroscopY), ki je
uporabna pri molekulah velikosti med 1000 in 2000 Da, saj je je pri njih NOE zelo šibak. Pri 2D
66
poleg 2D COSY korelacijskih vrhov opazimo za protone še dodatne vrhove, npr. tudi med
protonom NH in med protonoma Hb in Hg.
Slika 7. (Zgoraj) Sklopitve, ki jih zaznamo z 2D COSY in TOSCY NMR, ter pripadajoča spektra
valina posneta z obema tehnikama. (Spodaj) Prikaz dveh neskopljenih protonov, ki sta v
prostoru blizu skupaj. Njuno interakcijo lahko zaznamo z izvedbo 2D NOESY NMR
eksperimenta.
Za določitev 3D strukture proteina je posebej pomemben pojav, ki ga imenujemo jedrni
Overhauserjev efekt (ang. nuclear Overhauser effect - NOE). NOE je po definiciji prenos
polarizacije jedrnega spina iz ene spinske populacije jeder na drugo v procesu „navzkrižne
relaksacije“. Poenostavljeno je NOE interakcija magnetno aktivnih jeder oz. sklapljanje dipolov,
ki poteka preko prostora in ne preko kemijskih vezi, kot to velja za 2D COSY in TOCSY poskuse.
NOE dosežemo z aplikacijo specifične pulzne sekvence in tako detektiramo jedra, ki so
prostorsko blizu skupaj, vendar niso povezana preko kovalentnih vezi. 2D NOESY (Nuclear
Overhauser Effect SpectroscopY) NMR spektroskopija omogoča detekcijo interakcije med
atomi, ki so oddaljeni do približno 5-6 Å. Dobljeni 2D NOESY spekter je na prvi pogled podoben
2D COSY spektru, s signali resonanc istih jeder na diagonali. Signali, ki ne ležijo na diagonali, pa
nastanejo zaradi NOE in povezujejo resonanco tistih jeder, ki so prostorsko blizu. Med 2D NMR
poskusi, kjer opazujemo interakcijo preko prostora, omenimo še različico 2D NOESY
eksperimenta 2D ROESY (Rotating frame nuclear Overhauser Effect SpectroscopY), ki je
uporabna pri molekulah velikosti med 1000 in 2000 Da, saj je je pri njih NOE zelo šibak. Pri 2D
66
